Analytical validation of quantitative real-time PCR methods for quantification of trypanosoma cruzi DNA in blood samples from chagas disease patients

Título traducido de la contribución: Validación analítica de métodos cuantitativos de PCR en tiempo real para la cuantificación del ADN de trypanosoma cruzi en muestras de sangre de pacientes con enfermedad de Chagas

Juan Carlos Ramírez, Carolina Inés Cura, Otacilio Da Cruz Moreira, Eliane Lages-Silva, Natalia Juiz, Elsa Velázquez, Juan David Ramírez, Anahí Alberti, Paula Pavia, María Delmans Flores-Chávez, Arturo Muñoz-Calderón, Deyanira Pérez-Morales, José Santalla, Paulo Marcos Da Matta Guedes, Julie Peneau, Paula Marcet, Carlos Padilla, David Cruz-Robles, Edward Valencia, Gladys Elena CrisanteGonzalo Greif, Inés Zulantay, Jaime Alfredo Costales, Miriam Alvarez-Martínez, Norma Edith Martínez, Rodrigo Villarroel, Sandro Villarroel, Zunilda Sánchez, Margarita Bisio, Rudy Parrado, Lúcia Maria Da Cunha Galvão, Antonia Cláudia Jácome Da Câmara, Bertha Espinoza, Belkisyole Alarcón De Noya, Concepción Puerta, Adelina Riarte, Patricio Diosque, Sergio Sosa-Estani, Felipe Guhl, Isabela Ribeiro, Christine Aznar, Constança Britto, Zaida Estela Yadón, Alejandro G. Schijman

Resultado de la investigación: Contribución a una revistaArtículo

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Resumen

Un estudio internacional fue realizado por 26 laboratorios de PCR experimentados de 14 países para evaluar el rendimiento de las estrategias de PCR cuantitativa en tiempo real a doble cara (qPCR) sobre la base de sondas TaqMan para la detección y cuantificación de cargas parasitarias en muestras de sangre periférica de pacientes con enfermedad de Chagas. Se estudiaron dos métodos: ADN satelital (ADN satelital) qPCR y ADN kinetoplástido (ADN kDNA) qPCR. Ambos métodos incluían un control interno de amplificación. El rango reportable, la sensibilidad analítica, los límites de detección y cuantificación, y la precisión fueron estimados de acuerdo con las directrices internacionales. Además, se estimó la inclusividad y exclusividad con el ADN de las poblaciones que representaban las diferentes unidades de tipificación discreta de Trypanosoma cruzi y Trypanosoma rangeli y Leishmania spp. ambos métodos se impugnaron contra 156 muestras de sangre proporcionadas por los laboratorios participantes, incluidas muestras de pacientes agudos y crónicos con hallazgos clínicos variados, infectados por vía oral o transmisión vectorial. kDNA qPCR mostró una mejor sensibilidad analítica que SatDNA qPCR, con límites de detección de equivalentes de parásitos de 0,23 y 0,70/ml, respectivamente. Los análisis de muestras clínicas revelaron una alta concordancia en términos de sensibilidad y cargas parasitarias determinadas por las qPCRs de ADN satelital y kDNA. Este esfuerzo es un paso importante hacia la validación internacional de los métodos de qPCR para la cuantificación del ADN de T. cruzi en muestras de sangre humana, con el objetivo de proporcionar un biomarcador sustituto preciso para el seguimiento del diagnóstico y tratamiento de pacientes con la enfermedad de Chagas.
Idioma originalInglés estadounidense
Páginas (desde-hasta)605-615
Número de páginas11
PublicaciónJournal of Molecular Diagnostics
DOI
EstadoPublicada - ene 1 2015
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Ramírez, J. C., Cura, C. I., Da Cruz Moreira, O., Lages-Silva, E., Juiz, N., Velázquez, E., Ramírez, J. D., Alberti, A., Pavia, P., Flores-Chávez, M. D., Muñoz-Calderón, A., Pérez-Morales, D., Santalla, J., Marcos Da Matta Guedes, P., Peneau, J., Marcet, P., Padilla, C., Cruz-Robles, D., Valencia, E., ... Schijman, A. G. (2015). Analytical validation of quantitative real-time PCR methods for quantification of trypanosoma cruzi DNA in blood samples from chagas disease patients. Journal of Molecular Diagnostics, 605-615. https://doi.org/10.1016/j.jmoldx.2015.04.010