Standardization and validation of real time PCR assays for the diagnosis of histoplasmosis using three molecular targets in an animal model

Título traducido de la contribución: Estandarización y validación de ensayos de PCR en tiempo real para el diagnóstico de histoplasmosis utilizando tres dianas moleculares en un modelo animal

Luisa F. López, César O. Muñoz, Diego H. Cáceres, Ángela M. Tobón, Vladimir Loparev, Oliver Clay, Tom Chiller, Anastasia Litvintseva, Lalitha Gade, Ángel González, Beatriz L. Gómez

Producción científica: Contribución a una revistaArtículorevisión exhaustiva

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Resumen

La histoplasmosis se considera una de las micosis endémicas y sistémicas más importantes en todo el mundo. Hasta ahora se han desarrollado pocas técnicas moleculares para su diagnóstico. El objetivo de este estudio fue desarrollar y evaluar tres protocolos de PCR en tiempo real (qPCR) para diferentes genes codificadores de proteínas (antígenos 100-kDa, H y M) utilizando un modelo animal. Se obtuvieron tejidos pulmonares frescos y fijados con formalina e incluidos en parafina (FFPE) de ratones BALB/c inoculados i.n. con 2,5x106 levaduras de Histoplasma capsulatum o PBS a la 1, 2, 3, 4, 8, 12 y 16 semanas post-infección. Para analizar la sensibilidad y la especificidad se utilizó una colección de ADN de cultivos que representaban diferentes clados de H. capsulatum (30 cepas) y otros patógenos de interés médico (36 cepas de hongos relacionados y Mycobacterium tuberculosis). La sensibilidad y especificidad analíticas fueron del 100% cuando se analizaron los ADN de las distintas cepas. La mayor carga fúngica se produjo en la primera semana post-infección y la eliminación completa de los hongos se observó después de la tercera semana; se obtuvieron resultados similares cuando se demostró la presencia de células de levadura H. capsulatum en el análisis histopatológico. En la primera semana tras la infección, todos los tejidos pulmonares frescos y FFPE de animales infectados por H. capsulatum dieron resultados positivos para los protocolos de qPCR probados, excepto para el protocolo del antígeno M, que dio resultados variables cuando se analizaron muestras de tejido pulmonar fresco. En la segunda semana, todos los protocolos de qPCR mostraron resultados variables tanto para los tejidos frescos como para los FFPE. Las muestras de los ratones infectados en el resto de los momentos posteriores a la infección y de los ratones no infectados (controles) fueron negativas para todos los protocolos. Se observó una buena concordancia entre las UFC, el análisis histopatológico y los resultados de la qPCR para los protocolos de 100 kDa y antígeno H. Hemos estandarizado y validado con éxito tres ensayos de qPCR para detectar ADN de H. capsulatum en tejidos frescos y FFPE, y concluimos que los ensayos moleculares de 100-kDa y antígeno H son pruebas prometedoras para diagnosticar esta micosis.
Título traducido de la contribuciónEstandarización y validación de ensayos de PCR en tiempo real para el diagnóstico de histoplasmosis utilizando tres dianas moleculares en un modelo animal
Idioma originalInglés estadounidense
Número de artículoe0190311
Páginas (desde-hasta)1-15
Número de páginas15
PublicaciónPLOS ONE
Volumen12
N.º12
DOI
EstadoPublicada - dic. 29 2017

Áreas temáticas de ASJC Scopus

  • Ciencias Agrícolas y Biológicas General
  • General
  • Bioquímica, Genética y Biología Molecular General

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