Purification of Trypanosoma cruzi metacyclic trypomastigotes by ion exchange chromatography in sepharose-DEAE, a novel methodology for host-pathogen interaction studies

Lissa Cruz-Saavedra, Marina Muñoz, Cielo León, Manuel Alfonso Patarroyo, Gabriela Arevalo, Paula Pavia, Gustavo Vallejo, Julio César Carranza, Juan David Ramírez

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Resumen

Las tripomastigotes metacíclicas son esenciales para la comprensión de la biología de Trypanosoma cruzi, el agente de la enfermedad.
Enfermedad de Chagas. Sin embargo, la obtención de estas etapas biológicas en medio axénico es difícil. Técnicas basadas en
de carga y densidad del parásito durante las diferentes etapas, sin que se haya observado un alto grado de
eficacia en la purificación de tripomastigotes metacíclicos. Hasta ahora, no se ha implementado ningún protocolo en el que
sefarosa - DEAE se utiliza como resina. Por lo tanto, aquí probamos su capacidad para purificar tripomastigotes metacíclicos en
Infusión hepática Triptosa (LIT) en cultivos medianos. Un protocolo simple, fácil de ejecutar y eficaz basado en la tecnología de iones.
Se describe la cromatografía de intercambio en resina de Sefarado-DEAE para la purificación de tripomastigotes de T. cruzi.
Se utilizaron cepas de T. cruzi de las unidades de tipificación discreta (DTU) I y II. Las cepas fueron cosechadas en LIT
medio a una concentración de 1 × 107 epimastigotas/mL. Calculamos el tiempo de incremento de tripomastigotes
(TTI). A partir de los datos obtenidos, se realizó cromatografía de intercambio iónico con resina de sífilis DEAE. Para
verificar la pureza y viabilidad de las tripomastigotas, se realizó un cultivo en medio LIT con el consiguiente
verificación con tinción de giemsa. Evaluar si la técnica afectó la infectividad de los tripomastigotes, in vitro
se realizaron ensayos en células Vero e in vivo en ratones ICR-CD1. La técnica permitió la purificación de
tripomastigotes metacíclicos de otros estadios de T. cruzi en un porcentaje del 100%, se observó una mayor recuperación.
en cultivos de 12 días. Hubo diferencias con respecto a la recuperación de los tripomastigotes metacíclicos para ambos.
DTUs, siendo DTU TcI la que recuperó una mayor cantidad de estas formas. La técnica no afectó
infecciosidad del parásito in vitro y/o in vivo.
Idioma originalInglés estadounidense
Páginas (desde-hasta)27-32
Número de páginas6
PublicaciónJournal of Microbiological Methods
Volumen142
DOI
EstadoPublicación electrónica previa a su impresión - sep 1 2017

Huella Profundice en los temas de investigación de 'Purification of Trypanosoma cruzi metacyclic trypomastigotes by ion exchange chromatography in sepharose-DEAE, a novel methodology for host-pathogen interaction studies'. En conjunto forman una huella única.

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