Identification of disease-associated cryptococcal proteins reactive with serum IgG from cryptococcal meningitis patients

Cryptococcus neoformans, un patógeno fúngico oportunista presente en todas partes en el medio ambiente, causa meningitis criptocócica (CM) principalmente en pacientes inmunocomprometidos, como los pacientes con SIDA. Nuestro objetivo era identificar antígenos proteicos criptocócicos asociados a enfermedades a los que se dirige la respuesta inmunitaria humoral humana. Por lo tanto, utilizamos sueros de pacientes colombianos con CM, con o sin infección por VIH, y de individuos sanos que viven en la misma región. El análisis serológico reveló títulos elevados de IgG anticriptocócica en pacientes con CM VIH negativos, pero no en pacientes con CM VIH positivos, en comparación con los controles sanos. Por el contrario, los títulos de IgM anticriptocócica no se vieron afectados por la CM. Además, detectamos anticuerpos IgG e IgM preexistentes incluso en sueros de individuos sanos. La inducción observada de IgG anticriptocócica pero no de IgM durante la CM fue respaldada por el análisis de sueros de ratones infectados con C. neoformans. Se encontró un mayor aumento de IgG en ratones de tipo salvaje con una alta carga fúngica pulmonar en comparación con ratones con deficiencia de IL-4Rα que mostraban una baja carga fúngica pulmonar. Para identificar las proteínas a las que se dirigen los anticuerpos IgG anticriptocócicos humanos, aplicamos un enfoque cuantitativo de inmunoproteoma 2D que identifica manchas de proteínas criptocócicas reconocidas preferentemente por sueros de pacientes con CM o individuos sanos, seguido de un análisis de espectrometría de masas. Se expresaron de forma recombinante veintitrés proteínas criptocócicas y se confirmó que eran inmunorreactivas con sueros humanos. Catorce de ellas fueron descritas recientemente como proteínas inmunorreactivas. Doce proteínas se clasificaron como antígenos asociados a enfermedades, basándose en una inmunorreactividad significativamente más fuerte con sueros de pacientes con CM en comparación con individuos sanos. Las proteínas identificadas en nuestra evaluación amplían significativamente el conjunto de proteínas criptocócicas con potencial para (i) el desarrollo de nuevos agentes anticriptocócicos basados ​​en implicaciones en la virulencia o supervivencia de los criptococos, o (ii) el desarrollo de una vacuna anticriptocócicas, como varios candidatos. Carecen de homología con las proteínas humanas y se localizan extracelularmente. Además, este estudio define la inmunorreactividad anticriptocócica preexistente en individuos sanos a nivel molecular, identificando antígenos diana reconocidos por sueros de personas de control sanas.