A novel loop-mediated isothermal amplification-based test for detecting Neospora caninum DNA

Título traducido de la contribución: Un novedoso test basado en la amplificación isotérmica mediada por bucle para la detección del ADN de Neospora caninum.

Andrea Estefanía Ramos, Marina Muñoz, Jesús Alfredo Cortés-Vecino, Paola Barato, Manuel Alfonso Patarroyo

Resultado de la investigación: Contribución a una revistaArtículo

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Resumen

ANTECEDENTES: Neospora caninum es un parásito coccidiano que forma quistes y que se sabe que causa trastornos neurológicos en perros y abortos y mortalidad neonatal en vacas y otros animales. Este estudio reporta el desarrollo de un ensayo de amplificación isotérmica mediada por lazo (LAMP) basado en el gen Neospora caninum Nc-5 y compara su eficacia para detectar ADN con la de una prueba de PCR semianidad.
RESULTADOS: Se diseñaron seis primers basados en la región de repetición de Nc-5 de N. caninum. Los primers específicos de LAMP permitieron amplificar con éxito el ADN de N. caninum a 63 °C en 30 min. El ensayo LAMP fue altamente específico (es decir, no reveló reactividad cruzada con otras especies de parásitos) y tuvo un límite de detección de ADN en plásmidos de N. caninum bajo (1 fg), que es diez veces mayor que el de la PCR semianidad. La aplicabilidad del LAMP se evaluó utilizando un conjunto de muestras infectadas naturalmente (59 de heces caninas y cinco de abortos bovinos). El 39% (25/64) de las muestras infectadas naturalmente dieron positivo en ADN de N. caninum por LAMP y el 36% (23/64) por PCR semianidada. Sin embargo, el ensayo LAMP es mucho más rápido de realizar que la PCR semi-anidada y proporciona resultados en 30 minutos.
CONCLUSIÓN: Las condiciones de reacción optimizadas descritas en este estudio dieron como resultado una técnica sensible, específica y rápida para detectar el ADN de N. caninum. Considerando las ventajas de LAMP para la detección de ADN de N. caninum, se recomiendan ensayos adicionales destinados a probar su utilidad en una gama más amplia de muestras de campo.
Idioma originalInglés estadounidense
Páginas (desde-hasta)1-9
Número de páginas9
PublicaciónParasites and Vectors
Volumen10
N.º1
DOI
EstadoPublicada - nov 29 2017

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