Implementación de una metodología para extracción de vesículas extracelulares de líneas celulares y plasma humano

Los exosomas son vesículas con un diámetro que oscila entre los 30 y 100nm cuya síntesis es mediada por el sistema endosomal. La invaginación de la membrana celular genera el endosoma temprano, que madura a endosoma tardío y forma cuerpos multivesiculares (CMV), los cuales se fusionan con la membrana celular para liberar las vesículas al ambiente extracelular. Estas vesículas están compuestas por una membrana bi-lipídica rica en colesterol, ceramidas, y residuos de fosfatidilserina (PS). En su interior pueden almacenar ADN, ARN, MicroARNs, proteínas y lípidos. Los exosomas tienen variedad de funciones en diferentes escenarios que abarcan desde el transporte de moléculas y la comunicación célula-célula a nivel local o sistémico, hasta la regulación inmunológica.

Los exosomas juegan un papel fundamental en el microambiente tumoral, al favorecer la comunicación entre células tumorales o entre estas células tumorales y células del sistema inmune, razón por la que se considera que la secreción de exosomas es un mecanismo mediante el cual el tumor favorece su propio desarrollo al transportar moléculas moduladoras del sistema inmunológico tales como HLA-G, oncoproteínas y factores de crecimiento. Adicionalmente, también se ha descrito transferencia horizontal de diversos tipos de ARN que otorgan mayor agresividad a las células tumorales. Considerando la importancia de los exosomas en el desarrollo y progresión del cáncer, se plantea este proyecto con el objeto de generar en nuestro laboratorio, una metodología para la extracción y caracterización de vesículas extracelulares, con particular interés en exosomas, estableciendo las bases para el desarrollo de investigaciones más robustas con estas estructuras celulares y así contribuir al avance del entendimiento de la biología del cáncer.

- Se espera la participación activa de dos estudiantes de pregrado en biología con interés en involucrarse en investigación básica asociada a cultivos celulares, marcadores moleculares y expresión génica. Se espera que al final del trabajo los estudiantes presenten su trabajo de grado en comunicación escrita y oral. Uno de los estudiantes realizará su trabajo en caracterización de exosomas por microscopia, inmunoensayos y citometría de flujo y el otro estudiante tendrá a cargo la caracterización de los RNA´s transportados por exosomas.

- Vínculación de un joven investigador que será entrenado para apoyar el trabajo experimental con líneas celulares este con cargo a los fondos solicitados dentro de la propuesta.

- Vínculación de un asistente de investigación por parte del INC para apoyar el trabajo relacionado con tratamiento de muestras de plasma y cromatografía.

- Se pretende articular las actividades de los involucrados en el proyecto de investigación de manera que se fortalezca la investigación y se desarrollen habilidades que se ajusten al método científico entre los jóvenes participantes.